維生素E（Vitamin E，VE）試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/24 樣
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義
維生素E（Vitamin E）是一種脂溶性維生素，其水解產(chǎn)物為生育酚，是生物體中主要的抗
氧化劑之一，能阻止不飽和脂肪酸收到過(guò)氧化作用的損傷，維持不飽和脂肪酸細(xì)胞膜的完整
性和正常功能，具有延緩衰老、預(yù)防溶血性貧血作用，在醫(yī)藥、化妝品、保健品、食品行業(yè)
具有較高的應(yīng)用價(jià)值。
測(cè)定原理
VE 還原Fe3+為Fe2+，F(xiàn)e2+與1,10-菲羅啉產(chǎn)生有色絡(luò)合物，在530nm 有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、研缽、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL 玻璃比色皿、漩渦震蕩儀。
試劑組成和配制
提取液：液體100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體5mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體5mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體5mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體15mL×1 瓶，4℃保存。
樣本處理
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約0.2g，加入1mL
提取液）加入提取液，充分勻漿后用提取液定至2mL，在漩渦混勻儀上震蕩5min，于
25℃，5000g 離心10min，取上層測(cè)定。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議1000
萬(wàn)細(xì)胞加入2mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3 秒，間隔7 秒，
總時(shí)間3min）；在漩渦混勻儀上震蕩5min，于25℃，5000g 離心10min，取上層測(cè)定。
3. 血清：取0.2mL，加1.9mL 提取液，漩渦儀混勻上震蕩5min，于25℃，5000g 離心10min，
取上層測(cè)定。
測(cè)定操作
對(duì)照管 測(cè)定管
樣品（μL） 500 500
試劑一（μL） 100 100
試劑二（μL） 100
試劑三（μL） 100
充分混勻，25℃反應(yīng)5min
試劑四（μL） 300 300
充分混勻，于1mL 玻璃比色皿，無(wú)水乙醇調(diào)零，測(cè)定530nm 處吸光值，記為A
對(duì)照管和A 測(cè)定管，△A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。
計(jì)算公式
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y = 0.022x + 0.0065， R2 = 0.9978
1. 按照蛋白含量計(jì)算
VE 含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V 反總÷（V 樣×Cpr）
= 181.8×（△A -0.0065）÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
VE含量（μg/g）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V反總÷（V樣×W÷V樣總）
= 181.8×（△A -0.0065）÷ W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VE含量（μg/104 cell）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）
= 181.8×（△A -0.0065）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計(jì)算
VE含量（μg/mL）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V反總÷V樣×20
= 1818×（△A -0.0065）
V反總：反應(yīng)總體積，1mL；：V樣：加入樣本體積，0.5mL；V樣總：加入提取液體積，2mL； Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)
1. 若反應(yīng)體系產(chǎn)生沉淀，需要將樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專(zhuān)⒃谟?jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
2. 低檢出限為29.5μg/g。

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