H2S 含量測(cè)定試劑盒說明書

注意：正式測(cè)定之前選擇預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)

規(guī)格: 100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 10mL×1  瓶，4℃保存。

試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 1mL×1 管，4℃避光保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑 3mg×1 管，4℃避光保存

產(chǎn)品說明：

微量法

H2S 是一種新型氣態(tài)信號(hào)分子，存在于腦內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)，生理濃度的 H2S 對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)海馬的

長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)功能具有重要的調(diào)節(jié)作用，并對(duì)自發(fā)性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過程發(fā)揮著重要的病理生理效應(yīng)。

H2S 與醋酸鋅、N, N-二甲基對(duì)苯二胺和硫酸鐵銨等反應(yīng)生成亞甲基藍(lán)，亞甲基藍(lán)在 665nm 處有大吸收峰，通過測(cè)定其吸光值可計(jì)算 H2S 含量。

需自備的儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀、微量比色皿或96孔板、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品處理：

a. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10  的比例（建議稱取約 0.1g  組織，加入 1mL

提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

b. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10 4 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL  提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3  秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。

c. 血清（漿）：直接測(cè)定。

二、測(cè)定步驟： （取 1.5ml 離心管，按照下表操作）

d. 臨用前將標(biāo)準(zhǔn)品加入1ml試劑一充分溶解則為12.5μmol /mL H2S標(biāo)準(zhǔn)品溶液，稀釋100倍后為0.125μmol /mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液

三、H2S 含量計(jì)算公式：

• 按蛋白濃度計(jì)算

H2S含量（μmol /mg prot）=0.125×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白) ÷Cpr

• 按樣本質(zhì)量計(jì)算

H2S含量（μmol /g）=0.125×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白) ÷W

• 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

H2S含量（μmol /10⁴ cell）=0.125×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量

• 按照液體體積計(jì)算

H2S含量（μmol /mL）=0.125×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

注意事項(xiàng)：如樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品OD，可稀釋樣本或增大標(biāo)準(zhǔn)品濃度

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